2結(jié)果與分析
2.1 8株致病性副溶血性弧菌的耐藥性分析
采用K-B紙片擴(kuò)散法，從8株含tdh基因的致病性副溶血性弧菌中檢出6株耐藥菌株Vp 5，Vp 8，Vp 14，Vp 16，Vp 17，Vp 18。其中Vp 8耐慶大霉素，Vp 5、Vp 14、Vp 17均只耐阿米卡星，Vp 16耐阿米卡星和慶大霉素，Vp 18菌株耐阿米卡星，環(huán)丙沙星，和左氧氟沙星。圖1為Vp 2對(duì)AMC、AK、CTX的藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果，具體結(jié)果見(jiàn)表2。
圖1 Vp2對(duì)AMC、AK、CTX的藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.2 8株致病性副溶血性弧菌的生長(zhǎng)特性比較分析
表3 8株副溶血性弧菌用modified Gompertz模型擬合的生長(zhǎng)參數(shù)擬合結(jié)果
通過(guò)Bioscreen全自動(dòng)微生物生長(zhǎng)曲線分析儀測(cè)定這8株菌生長(zhǎng)過(guò)程的比濁度，用修正的Gompertz擬合測(cè)定的數(shù)據(jù)。
修正的Gompertz模型擬合結(jié)果R2均在0.98以上，MSE均小于等于0.003，可知修正的Gompertz模型適合擬合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
由表3及圖2修正的Gompertz的擬合結(jié)果可知，20℃時(shí)Vp 18菌株的生長(zhǎng)最快，方差分析可知，與Vp5，Vp 8，Vp 14，Vp 2均存在顯著性差異(p<0.05)與Vp 16，Vp 17，Vp 21不存在顯著性差異(p>0.05)，Vp 17次之，僅與Vp 2存在顯著性差異，Vp5生長(zhǎng)最慢，但其僅與Vp 18有顯著性差異;8株菌的延滯期無(wú)顯著性差異(p>0.05);Vp2的最大生長(zhǎng)量最大，但與Vp5沒(méi)有顯著性差異(p>0.05)，與其他的菌株都有顯著性差異(p<0.05)。Vp18的最大生長(zhǎng)量最小，與Vp2和Vp5有顯著性差異(p<0.05)，與其他的菌株均無(wú)顯著性差異(p>0.05)。
25℃時(shí)Vp 18菌株生長(zhǎng)最快，與Vp 5，Vp 8，Vp 14，Vp 2均存在顯著性差異(p<0.05)，與Vp16，Vp17，Vp21不存在顯著性差異(p>0.05)，Vp 17次之，除了與Vp 5，Vp 8，Vp 14，Vp 2有顯著性差異外，與其他菌株均無(wú)顯著性差異，而Vp 2最慢，與Vp 18，Vp17，Vp16，Vp21存在顯著性差異;Vp 5的延滯期最短，只與Vp 2有顯著性差異(p<0.05)，而Vp 2的延滯期最長(zhǎng)，與Vp 5，Vp 8，Vp 14，Vp 16有顯著性差異，而與其他幾株菌無(wú)顯著差異(p>0.05);Vp2的最大生長(zhǎng)量最大，與其他菌株均有顯著性差異(p<0.05)，Vp 8的最大生長(zhǎng)量最少，與其他菌株無(wú)顯著性差異(p>0.05)。
37℃時(shí)8株菌的最大比生長(zhǎng)速率無(wú)顯著性差異(p>0.05);Vp 2的延滯期最長(zhǎng)，且與其他的菌株有顯著性差異(p<0.05)，而其他幾株菌間無(wú)顯著性差異(p>0.05);Vp 2的最大生長(zhǎng)量最大，與Vp 8和Vp 18存在顯著性差異(p<0.05)，與其余菌株均無(wú)顯著性差異(p>0.05)，Vp 18的最大生長(zhǎng)量最少，與Vp 2和Vp 21存在顯著性差異(p<0.05)，與其余菌株均無(wú)顯著性差異(p>0.05)。
綜上，不同耐藥致病副溶血性弧菌菌株的生長(zhǎng)參數(shù)存在一定的差異性，但是菌株的各個(gè)生長(zhǎng)參數(shù)的大小與菌株的耐藥性的程度之間沒(méi)有明顯的對(duì)應(yīng)關(guān)系。且發(fā)現(xiàn)一株三重耐藥性菌株Vp 18與另外一株敏感性副溶血性弧菌Vp 5在20℃和25℃下的最大比生長(zhǎng)速率有顯著差異，其他菌株無(wú)顯著差異。
圖2 8株副溶血性弧菌生長(zhǎng)曲線及其用modified Gompertz模型擬合結(jié)果
2.3 8株致病性副溶血性弧菌的ERIC-PCR圖譜分析
由圖3，條帶的條數(shù)及位置獲得的聚類分析圖譜可知，耐藥性菌株Vp 5，Vp 8，Vp 14，Vp 16有100%的相似性。此4株菌株與非耐藥性菌株Vp 21有89%的相似性，耐藥菌株Vp 18與非耐性菌株Vp 2有89%的相似性。在相似系數(shù)0.86處，此八株菌株可以分為兩大類，Vp5，Vp 8，Vp 14，Vp 16與Vp21和Vp17歸為一類，Vp 18與V p2為一類。ERIC-PCR是一種有效的細(xì)菌基因分型方法，能夠精確確定菌株間的親緣關(guān)系[12]，為菌株的差異性比較提供了基因型信息。ERIC-PCR圖譜與菌株的耐藥性沒(méi)有明顯的對(duì)應(yīng)性。
圖3 8株菌的ERIC圖譜及擴(kuò)增條帶的UPGMA系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)聚類分析
3結(jié)論
本文比較了耐藥性致病副溶血性弧菌與非耐藥性致病副溶血性弧菌的生長(zhǎng)差異。并用修正的Gomperz growth model擬合了此8株耐藥性菌株與非耐藥性菌株在20、25、37℃下，在TSB(含3%NaCl)中的生長(zhǎng)曲線。
在37℃適宜溫度下，八株菌的最大比生長(zhǎng)速率無(wú)顯著性差異(p>0.05)，而在20℃和25℃條件下，Vp 18生長(zhǎng)最快與Vp 5，Vp 8，Vp 14，Vp 2均存在顯著性差異(p<0.05)。與Lianou[13-14]等報(bào)道的結(jié)果一致，說(shuō)明溫度會(huì)影響副溶血性弧菌的μmax間的差異，差異性隨著溫度的降低而增高。
三重耐藥的致病副溶血性弧菌Vp 18的生長(zhǎng)明顯優(yōu)于非耐藥性菌株Vp 2，說(shuō)明耐藥性與菌株的生長(zhǎng)快慢有一定的聯(lián)系，可能由于菌株的生長(zhǎng)速率快，產(chǎn)生變異性的可能性大，獲得耐藥性的概率也隨之增大。菌株之間的微生物生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的變異性將會(huì)對(duì)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的準(zhǔn)確性帶來(lái)影響[15]，此結(jié)果可為耐藥性副溶血性弧菌的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供數(shù)據(jù)支持。
耐藥性致病副溶血性弧菌Vp 18與非耐藥性致病性副溶血性弧菌Vp 2的ERIC-PCR圖譜歸為一類，表明這兩株菌的亞型相似，也說(shuō)明耐藥性基因可能來(lái)自質(zhì)粒上，這也為副溶血性弧菌的耐藥機(jī)制的研究提供了一定的參考。
不同耐藥性致病副溶血性弧菌在20℃、25℃、37℃下的生長(zhǎng)曲線（一）
不同耐藥性致病副溶血性弧菌在20℃、25℃、37℃下的生長(zhǎng)曲線（二）
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