嗜熱四膜蟲Tetrahymenathermophila是一種單細(xì)胞真核生物[1]，隸屬于纖毛門寡膜綱膜口目四膜蟲科四膜蟲屬。嗜熱四膜蟲被廣泛用于污染物毒理學(xué)研究的模式生物，近年來(lái)常常被用作評(píng)估生態(tài)毒性以及生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脫氫酶(LDH)等抗氧化相關(guān)酶作為觀察指標(biāo)用以探究毒物對(duì)嗜熱四膜蟲的影響?；蚪M學(xué)研究表明四膜蟲和人類基因有較高程度的相似性，因此以四膜蟲作為分子生物學(xué)研究對(duì)象，探明藥物或者毒物對(duì)高等生物作用機(jī)理有較為可靠的理論依據(jù)。有研究用抗菌劑三氯生(triclosan，TCS)和三氯卡班(triclocarban，TCC)干預(yù)四膜蟲，發(fā)現(xiàn)TCS和TCC在環(huán)境相關(guān)濃度下均可干擾嗜熱四膜蟲的抗氧化機(jī)制，分別表現(xiàn)為SOD、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶(GST)的活力增加，LDH活力的降低[2]。還有研究抗紫外濾光片的作用，以四膜蟲為對(duì)象觀測(cè)其細(xì)胞內(nèi)SOD、GPx抗氧化酶的活性[3]。課題組基于四膜蟲這種模式生物特點(diǎn)，利用竹節(jié)參、六味地黃丸、金貴腎氣丸等具有補(bǔ)益作用的單味藥物以及方劑，對(duì)嗜熱四膜蟲生長(zhǎng)曲線、氧化酶及其相關(guān)基因進(jìn)行研究[4-5]。
目的：以經(jīng)典方當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)四膜蟲生長(zhǎng)曲線和抗氧化酶基因的作用探討篩選抗氧化藥物的新方法。方法：將不同劑量的當(dāng)歸補(bǔ)血湯接種于嗜熱四膜蟲的培養(yǎng)液中，以無(wú)菌蒸餾水為空白對(duì)照，觀察嗜熱四膜蟲的生長(zhǎng)曲線，另外，對(duì)上述不同培養(yǎng)液中的嗜熱四膜蟲采用Real Time-PCR法測(cè)定嗜熱四膜蟲體內(nèi)的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase，GPx4)、硫氧還蛋白還原酶(Thioredoxin reductases，TxnRd2)的基因表達(dá)。結(jié)果：當(dāng)歸補(bǔ)血湯干預(yù)組生長(zhǎng)曲線與空白組相比有明顯的提高。與空白組相比，嗜熱四膜蟲的GPx4、TxnRd2基因表達(dá)均顯著升高。結(jié)論：當(dāng)歸補(bǔ)血湯能夠明顯改善四膜蟲生長(zhǎng)曲線，促進(jìn)GPx4、TxnRd2基因mRNA表達(dá)，提示生物體生長(zhǎng)曲線可能與抗氧化酶基因表達(dá)有關(guān)。
當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)四膜蟲生長(zhǎng)曲線的影響
與空白組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯能夠明顯影響四膜蟲生長(zhǎng)曲線。由圖1可觀察到，15h后四膜蟲的生長(zhǎng)量達(dá)到平臺(tái)期，隨著藥物濃度的增加，四膜蟲平臺(tái)期數(shù)量明顯提高。
圖1當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)四膜蟲生長(zhǎng)曲線的影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)嗜熱四膜蟲生長(zhǎng)曲線可能是通過(guò)影響GPx-4、TxnRd2基因表達(dá)來(lái)得以實(shí)現(xiàn)。目前對(duì)抗氧化藥物的篩選一般利用動(dòng)物模型或者建立相應(yīng)的細(xì)胞模型，通過(guò)檢測(cè)血液、組織及細(xì)胞中抗氧化酶的含量達(dá)到篩選中藥以及活性部位的目的。
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