枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）具有調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡、提高飼料轉(zhuǎn)化率和提高動(dòng)物免疫力等功能，是微生物飼料添加劑的常用菌種。但由于對(duì)選育、傳代和保藏等技術(shù)的不重視，導(dǎo)致其性能?chē)?yán)重退化，選擇抗逆性強(qiáng)和發(fā)酵效果佳的菌株用于動(dòng)物飼料添加具有重要意義。該研究觀察了一株枯草芽孢桿菌的形態(tài)特征，測(cè)定了其生長(zhǎng)曲線、抗逆性及所發(fā)酵飼料的pH值和幾種消化酶的活力變化，以為其推廣應(yīng)用提供依據(jù)。結(jié)果表明：該株枯草芽孢桿菌具有本種所特有的形態(tài)特征；在37℃、180 r/min條件下培養(yǎng)，無(wú)生長(zhǎng)延滯期，生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期為0～6 h，生長(zhǎng)穩(wěn)定期為6～10 h，生長(zhǎng)衰亡期為10 h以后；分別在37℃、70℃、80℃、90℃和100℃的水浴中處理10min后，其存活率差異不顯著（P＞0.05）；在1%～5%的膽鹽中生長(zhǎng)存活率均大于100%；在pH值為2的酸性環(huán)境中培養(yǎng)60min，存活率高達(dá)58.8%（P≤0.05）；發(fā)酵飼料的pH值隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯降低，而蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶活力顯著升高（P≤0.05）。表明該株枯草芽孢桿菌的飼料學(xué)特性?xún)?yōu)良，是理想的有益微生物飼料添加劑。
畜牧養(yǎng)殖過(guò)程對(duì)抗生素的不規(guī)范使用，導(dǎo)致了病原微生物耐藥性增強(qiáng)、藥物殘留和食品安全等諸多問(wèn)題，并最終威脅到人類(lèi)健康。開(kāi)發(fā)綠色新型飼用添加劑來(lái)替代或減少抗生素的使用將有助于我國(guó)畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。微生態(tài)制劑是較理想的飼用抗生素替代品。其能生成乳酸、短鏈脂肪酸和抑菌活性物質(zhì)等有益因子，這不僅有利于胃腸道酸性環(huán)境的形成，還能調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群平衡，促進(jìn)消化代謝和提高飼料轉(zhuǎn)化率。對(duì)豬的飼喂試驗(yàn)結(jié)果表明，益生菌能明顯提高豬的生長(zhǎng)速度，改善飼料的利用率，提高仔豬存活率以及降低腹瀉的發(fā)病率。
枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）是我國(guó)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的可直接飼喂動(dòng)物的益生菌菌種之一。近年，人們圍繞枯草芽孢桿菌菌株的篩選、發(fā)酵技術(shù)和添加策略的優(yōu)化等開(kāi)展了大量的工作。但由于飼料加工過(guò)程中的高溫處理（可達(dá)90℃以上）和制粒等環(huán)節(jié)對(duì)有益微生物有明顯的殺滅作用，動(dòng)物采食后，益生菌也會(huì)被腸道環(huán)境中的胃酸、胃液和膽鹽等抑制甚至殺滅。故選擇抗逆性強(qiáng)、發(fā)酵效果好的有益微生物菌株具有重要意義。鑒于此，本研究對(duì)一株枯草芽孢桿菌的飼料學(xué)特性進(jìn)行了檢測(cè)，從而為該菌株的推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料與儀器
1.1.1試驗(yàn)菌株
枯草芽孢桿菌LBD-1菌株由廣東綠百多生物科技有限公司惠贈(zèng)。
1.1.2主要試劑
營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基均購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限公司；Folin Ciocalteu試劑盒為北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；革蘭氏染色盒購(gòu)自廣東微生物科技有限公司；人工胃液、膽鹽均參照文獻(xiàn)制備，所用試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。發(fā)酵所用飼料為正大102小雞料。
1.1.3主要儀器
BC/BD-27生化恒溫培養(yǎng)箱，SPX-250B-Z超凈工作臺(tái)，SW-CJ-2F震蕩培養(yǎng)箱，HHS-11-4可見(jiàn)光分光光度計(jì)，Bioscreen全自動(dòng)生長(zhǎng)曲線分析儀，密封型手提式粉碎機(jī)。
1.2方法
本研究過(guò)程主要參照楊鋒等、董尚智等、Alonso等的研究報(bào)告及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB 8275—2009、SB/T 10317—1999和NY/T912—2004的方法進(jìn)行。
1.2.1枯草芽孢桿菌菌落形態(tài)觀察和菌體鏡檢將枯草芽孢桿菌LBD-1菌株進(jìn)行平板劃線后放入37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h和48 h，然后挑取典型菌落菌體進(jìn)行革蘭氏染色及鏡檢。
1.2.2種子液制備無(wú)菌條件下，從菌種保存斜面中挑取1環(huán)菌苔，接入營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，即得到細(xì)菌種子培養(yǎng)液。
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