氟磺胺草醚主要用于花生、大豆的芽前芽后使用,高效、低毒、選擇性強(qiáng)[1],大豆田常用的25%氟磺胺草醚水劑是一種莖葉處理的除草劑,其較長(zhǎng)的半衰期使氟磺胺草醚在連作的土壤中不斷積累,甚至影響到后茬作物的正常生長(zhǎng),產(chǎn)生藥害。
玉米作為氟磺胺草醚敏感作物,可用來(lái)檢測(cè)氟磺胺草醚的降解能力,試驗(yàn)表明:10 d苗齡玉米苗的長(zhǎng)勢(shì)隨氟磺胺草醚殘留量的增加而下降,當(dāng)殘留量達(dá)到0.30 mg·kg-1時(shí),玉米苗基本枯死,與高世杰等[15]、白杰等[16]在氟磺胺草醚的對(duì)玉米毒害作用研究相比,雖然方法有所不同,但具有相同的變化規(guī)律,可作為氟磺胺草醚降解能力的生物檢測(cè)手段,在檢測(cè)氟磺胺草醚的降解能力的同時(shí),也檢測(cè)出FCX2菌株及其代謝物是對(duì)玉米生長(zhǎng)特性的綜合影響,通過(guò)生物檢測(cè)試驗(yàn),加有FCX2菌株的處理上玉米苗的鮮重比未加菌的高出了11.36%,證明FCX2菌株及其代謝物對(duì)玉米苗的藥害有顯著的改善作用,使玉米苗長(zhǎng)勢(shì)得到顯著恢復(fù),這與以往僅僅通過(guò)高效液相色譜分析檢測(cè)而獲得氟磺胺草醚降解菌,單一追求降解率不同[8-14],利用生物檢測(cè)法篩選氟磺胺草醚降解菌,充分考慮了其菌株在生長(zhǎng)代謝過(guò)程中可能產(chǎn)生的大量未知的代謝成分和菌體本身對(duì)檢測(cè)生物的整體效應(yīng),使所獲降解菌株更具應(yīng)用前景。
FCX2菌株生長(zhǎng)特性初探
不同溫度下的生長(zhǎng)情況:按10%的接種量接入對(duì)數(shù)期FCX2菌株培養(yǎng)液于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基內(nèi),分別放入20、25、30、35℃和40℃,150 r·min-1條件下培養(yǎng),利用紫外分光光度計(jì)每隔4 h測(cè)定OD值,波長(zhǎng)600 nm,3次重復(fù)[7-8]。
不同pH下的FCX2生長(zhǎng)情況:用硫酸或氫氧化鈉將牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基pH分別調(diào)成5、6、7、8和9,分別按10%接種量接入對(duì)數(shù)期FCX2菌株培養(yǎng)液,150 r·min-1條件下培養(yǎng),并每隔4 h測(cè)定OD值,3次重復(fù)[9]。
不同N源下的FCX2的生長(zhǎng)情況:基礎(chǔ)無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中分別加等量的牛肉膏、酵母膏和蛋白胨,pH值8,30℃,150 r·min-1條件下培養(yǎng),并每隔4 h測(cè)定OD值[17-21],3次重復(fù)。
不同C源下的FCX2的生長(zhǎng)情況:基礎(chǔ)無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中分別加等量的蔗糖、牛肉膏、可溶性淀粉和葡萄糖,pH值8,30℃,150 r·min-1條件下培養(yǎng),并每隔4 h測(cè)定OD值,3次重復(fù)[11,13]。
FCX2的生長(zhǎng)特性初探
不同初始的pH條件下,F(xiàn)CX2菌株生長(zhǎng)趨勢(shì)相同,即菌液均在8 h后達(dá)到最大OD值,但不同條件下的最大OD值并不相同,其中該菌最適的pH為8。圖1的結(jié)果同樣說(shuō)明FCX2菌株在供試pH6-9范圍內(nèi)該菌均可達(dá)到最大產(chǎn)量,而在pH5的初始狀態(tài)下,F(xiàn)CX2菌株培養(yǎng)液OD幾乎不變,菌體生長(zhǎng)接近停止,說(shuō)明菌體無(wú)論是在產(chǎn)量還是在生長(zhǎng)速率上均較低,可能是因?yàn)槌跏嫉乃嵝原h(huán)境對(duì)菌體生長(zhǎng)產(chǎn)生了抑制作用。
圖1不同pH值條件下FCX2菌株的生長(zhǎng)情況
不同溫度下的培養(yǎng)表明:30℃的條件下,F(xiàn)CX2菌株無(wú)論在菌體生長(zhǎng)速率還是在菌體最大產(chǎn)量上均較高,表明FCX2菌株的最適溫度為30℃;而在20℃和25℃條件下,F(xiàn)CX2菌株菌體生長(zhǎng)速率均很慢,且達(dá)到平穩(wěn)期的時(shí)間較晚,說(shuō)明溫度越低FCX2生長(zhǎng)速度越慢;當(dāng)培養(yǎng)溫度為35℃和40℃時(shí),雖然菌液很快達(dá)到穩(wěn)定期,但明顯可以看出,達(dá)到穩(wěn)定期時(shí)菌液的濃度是很低的,當(dāng)培養(yǎng)溫度達(dá)40℃時(shí)菌液濃度較其它溫度都要低,也說(shuō)明高溫對(duì)此菌有一定的抑制作用。
圖2不同溫度條件下FCX2菌株的生長(zhǎng)情況
不同N源的培養(yǎng)結(jié)果表明:牛肉膏、酵母膏和蛋白胨均可作為FCX2菌株的氮源,且蛋白胨為氮源時(shí)FCX2菌株的生長(zhǎng)速率最快,且到穩(wěn)定期時(shí)OD可達(dá)到1.463 7;酵母膏為氮源時(shí),菌液達(dá)穩(wěn)定期時(shí)OD值為1.456 1,但差別并不顯著;牛肉膏為氮源時(shí),菌液達(dá)穩(wěn)定期時(shí)OD值為1.384 2,且較上述兩者差異顯著,而從該生長(zhǎng)曲線同樣可看出,該菌的生長(zhǎng)速率也較慢。
圖3不同氮源條件下FCX2菌株的生長(zhǎng)情況
碳源培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明:以葡萄糖為碳源時(shí),F(xiàn)CX2菌株生長(zhǎng)速率較快,而牛肉膏為碳源時(shí),雖然生長(zhǎng)速率略低于葡萄糖,但FCX2菌株在穩(wěn)定期OD值卻可以達(dá)到最大的1.493 1,但以淀粉為碳源時(shí),無(wú)論生長(zhǎng)速率還是穩(wěn)定期OD值均要比前三者三種碳源低,綜合考慮認(rèn)為葡萄糖為最適碳源,淀粉最不適于作為FCX2的碳源。
圖4不同碳源條件下FCX2菌株的生長(zhǎng)情況
總結(jié)
盡管生物檢測(cè)法有著諸多優(yōu)點(diǎn),但生物檢測(cè)手段的干擾因素較多,比如FCX2菌株本身或其代謝成分對(duì)玉米苗生長(zhǎng)的影響,并不能準(zhǔn)確的反映出FCX2降解率,需要利用高效液相色譜檢測(cè),測(cè)得5 d降解率達(dá)44.86%,與大多數(shù)的已獲得的氟磺胺草醚降解菌相比[8-14],這樣的結(jié)果并不是很高,但其發(fā)酵液對(duì)玉米苗藥害的改善明顯,可用作為氟磺胺草醚降解菌。通過(guò)FCX2菌株發(fā)酵液對(duì)玉米種子萌發(fā)試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)其促生能力顯著,亦可作為玉米促生菌來(lái)使用,但其發(fā)酵液pH為9.7,會(huì)導(dǎo)致玉米發(fā)芽率顯著下降,應(yīng)用時(shí)要注意控制使用比例或調(diào)節(jié)pH,這一點(diǎn)與胡凱鳳等[23]的研究規(guī)律也基本保持了一致性。研究FCX2菌株生長(zhǎng)特性發(fā)現(xiàn),其最適生長(zhǎng)溫度為30℃,但無(wú)論在20℃,還是40℃都能很好的生長(zhǎng),表明對(duì)溫度的適應(yīng)能力較強(qiáng);其最適pH為8,在pH5的環(huán)境幾乎停止生長(zhǎng),但在pH6~pH9的環(huán)境是可以正常生長(zhǎng)的,這說(shuō)明FCX2菌株適于一些中性或偏堿的土壤;生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)特性的試驗(yàn)表明,最適碳源為葡萄糖,這與葡萄糖為單糖便于利用也相符[17],而最適氮源為蛋白胨,是比較適合作為FCX2菌株氮的來(lái)源,為了更有效的發(fā)揮其降解功能,還需進(jìn)一步的研究FCX2菌株應(yīng)用的條件優(yōu)化、預(yù)防菌體產(chǎn)堿作用對(duì)作物的影響,以便最大程度發(fā)揮其能力。
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