微生物廣泛分布于地球表面各處及各種極端的環(huán)境,微生物與微生物之間或與其他生物存在著各式各樣的依存關(guān)系。在自然界當(dāng)中,微生物不僅參與了自然界的C、N、S等元素的循環(huán),而且在農(nóng)業(yè)中以菌造肥、以菌防病、以菌催長,在工業(yè)中制造皮革、處理廢水、降解有機(jī)磷和有毒物質(zhì),在發(fā)酵工程和酶工程上也起著重要的作用。然而少數(shù)有害微生物也對人類生活造成危害,主要表現(xiàn)為水體中腸道致病菌和非腸源性的微生物的污染,食品的收獲、運(yùn)輸、加工和貯藏過程微生物入侵,以及臨床醫(yī)學(xué)中介入性治療引起的微生物感染造成的危害等。


因此,研究微生物在不同環(huán)境的生長有助于了解微生物的屬性,從而充分利用微生物的有益作用為人類造福,同時(shí)超快診斷有害微生物并設(shè)法消除有害微生物給人類帶來的危害來提供有益的幫助。目前,微生物生長檢測方法可以分為兩大類:侵入式測量和非侵入式測量。早期以侵入式測量方式為主,包括:稱干重法、菌絲長度測量法、體積測量法、微生物計(jì)數(shù)法、生理指標(biāo)法等。但是由于操作者需要學(xué)習(xí)使用顯微鏡、梯度稀釋菌液、菌液涂布、離心、酸堿滴定、配制溶液等專業(yè)技術(shù),并且工作量大,操作耗時(shí)長,獲取的采樣點(diǎn)少,侵入式操作導(dǎo)致的雜菌干擾、培養(yǎng)基含量減少等因素,微生物生長檢測結(jié)果往往不夠精確而且效率低下,所以該類檢測方法難以實(shí)現(xiàn)快速、精確自動化分析微生物生長。


微生物的生長伴隨著一系列與生長量相平行的生理指標(biāo)也發(fā)生變化,其中可用于快速生長測定主要包括:RNA,DNA,P,ATP,乙酰等含量以及產(chǎn)熱,黏度,產(chǎn)酸,產(chǎn)二氧化碳?xì)怏w(用標(biāo)記葡萄糖做基質(zhì)),耗氧,透光度等指標(biāo)。這些物質(zhì)也是構(gòu)成當(dāng)前非侵入式微生物測量方法的基本依據(jù)。近年來,可用于分析這些生物指標(biāo)的微生物傳感器陸續(xù)被研究者提出,通過反演這些生物指標(biāo)的變化可以獲取微生物的生長狀態(tài),也是尋求一種非侵入式、簡便、準(zhǔn)確、快速、自動化的微生物生長檢測方法的主流。二氧化碳作為微生物生長代謝的產(chǎn)物之一,其變化量能實(shí)時(shí)快速反映微生物的生長情況。


目前,基于二氧化碳的檢測方案已經(jīng)快速應(yīng)用于微生物生長曲線測量??烧{(diào)諧半導(dǎo)體激光光譜技術(shù)(TDLAS)作為一種響應(yīng)時(shí)間快、高靈敏度、選擇性強(qiáng)、高分辨率、結(jié)構(gòu)簡單、非侵入式的痕量氣體檢測技術(shù)已經(jīng)成功的應(yīng)用于大氣檢測、工廠一排放等領(lǐng)域,而波長調(diào)制技術(shù)作為一種可調(diào)諧半導(dǎo)體光譜技術(shù),通過對入射的激光波長進(jìn)行調(diào)制來壓制背景噪聲信號,將檢測的靈敏度提高二個(gè)數(shù)量級,進(jìn)而探測更低的氣體濃度。


本文依據(jù)波長調(diào)制光譜技術(shù)的優(yōu)點(diǎn),研究了一種在封閉空間內(nèi)、有限有機(jī)物條件下的微生物生長曲線測量方法,獲得了一種非侵入式、響應(yīng)時(shí)間快、高靈敏度、高分辨率等優(yōu)勢的微生物曲線測量方法,并將該微生物生長曲線測量方法應(yīng)用于不同溫度條件下的微生物生長測量,同時(shí)對測量曲線進(jìn)行擬合,獲取了微生物在不同培養(yǎng)條件下的生長參量以及微生物生長與環(huán)境因素的關(guān)系,同時(shí)提出了一種波長調(diào)制光譜技術(shù)測量的壓力補(bǔ)償方案,克服了測量過程中壓力變化帶來的測量誤差,最后將該研究方法應(yīng)用于血培養(yǎng)檢測。


與現(xiàn)有儀器相比較,利用基于波長調(diào)制光譜技術(shù)的血培養(yǎng)系統(tǒng)測厭氧培養(yǎng)瓶的陽性報(bào)警結(jié)果與現(xiàn)有儀器結(jié)果吻合程度很好,需氧、兼性厭氧培養(yǎng)瓶獲得的陽性報(bào)警結(jié)果僅有1個(gè)誤差,并且分析造成該結(jié)果的原因,檢測結(jié)果未出現(xiàn)出現(xiàn)假陰性結(jié)果,同時(shí)檢測現(xiàn)有儀器中1個(gè)假陽性結(jié)果,該方法獲得了很好測量結(jié)果。本文研究成果將進(jìn)一步推進(jìn)TDLAS技術(shù)應(yīng)用于微生物生長檢測,為今后的研究做了鋪墊,最后對全文進(jìn)行總結(jié),提出了下一步工作展望。

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