真菌培養(yǎng)
真菌培養(yǎng)是臨床上病原性真菌常用的非常重要的檢查方法。
適用條件：
確定臨床標本中病原真菌的種類，提高對病原體檢出的陽性率，保存菌種，確定病原真菌的藥物敏感性、篩選耐藥菌株；一旦發(fā)現(xiàn)肯定的致病原，譬如紅色毛癬菌或新生隱球菌時，即可確立診斷。
所用培養(yǎng)基的種類和意義：
1、基礎(chǔ)分離培養(yǎng)基：只提供病原性真菌生長所需要的最基本成分譬如碳、氮、磷以及礦物質(zhì)的培養(yǎng)基。
2、沙堡弱氏培養(yǎng)基（SDA）：由Sabouraud于18世紀開發(fā)，起初用粗制蛋白胨作氮源，以麥芽糖或蜂蜜為碳源。大多數(shù)真菌生長尚可，隨后用精制蛋白胨和葡萄糖代替原有成分。Emmons改良后使其碳水化合物為2%，pH升至6.8-7.0，加入放線菌酮和氯霉素以抑制腐生型真菌（多數(shù)可能為條件致病菌）和大多數(shù)細菌（并非所有細菌）。含這兩種抗生素的SDA（pH6.8-7.0）已有商品供應(yīng)。放線菌酮也抑制新生隱球菌、一些念珠菌、煙曲霉等，應(yīng)該引起注意。含4%糖、低pH的SDA仍用于皮膚癬菌的形態(tài)學研究。
3、腦心浸膏瓊脂（BHI）：BHI也用于雙相真菌皮炎芽生菌等從菌絲相向酵母相轉(zhuǎn)變時，其中也可以加入抗生素和血液制品。
4、抑制性霉菌瓊脂（IMA）：氯霉素可抑制細菌的生長而不抑制真菌的生長，IMA用于臨床標本最初的增菌培養(yǎng)，常用于篩選防線菌酮敏感的真菌，如隱球菌、組織胞漿菌和接合菌。
5、特殊培養(yǎng)基：包括（1）、咖啡酸瓊脂（CAA），用于辨認新生隱球菌，因為新生隱球菌含有酚氧化酶，在CAA培養(yǎng)基中產(chǎn)生黑色素，使菌落呈黑色；此培養(yǎng)基有助于混合培養(yǎng)物中選擇性地培養(yǎng)新生隱球菌；CAA培養(yǎng)基對光敏感，應(yīng)加以避光保護。（2）、鳥食瓊脂（BA），分離痰等污染嚴重的標本中新生隱球菌。（3）、KT培養(yǎng)基，含吐溫、蛋白、煙酸和0.3%水解酪蛋白氨基酸，用于皮炎芽生菌轉(zhuǎn)相（為酵母相）培養(yǎng)時使用。（4）、CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基，將培養(yǎng)后的單菌落在CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基劃線接種，30-37°C培養(yǎng)48小時，觀察顏色變化，根據(jù)不同顏色鑒定菌種。
真菌培養(yǎng)標本的要求：
在Ⅱ級生物安全柜中進行培養(yǎng)操作。血液標本應(yīng)該注意合適的量，并多次培養(yǎng)，最好使用解離離心系統(tǒng)處理標本；腦脊液培養(yǎng)陽性可確診，但陽性率低；懷疑呼吸系統(tǒng)真菌感染時，使用深咳出的痰，必要時可進行纖維支氣管鏡防污染毛刷取痰、支氣管肺泡灌洗液、胸腔積液、活檢組織；懷疑泌尿系統(tǒng)感染時，采集清晨清潔的中段尿，最好采集自留置導尿管，盡快接種；皮膚、甲和毛發(fā)應(yīng)收集到折好的黑紙中，盡快接種。
培養(yǎng)條件：
建議使用室溫或30°C培養(yǎng)7天，在這種溫度下幾乎所有病原性真菌生長較快較好。在某些情況下，做高溫輔助培養(yǎng)有助于鑒定，譬如煙曲霉在45°C培養(yǎng)時可用來區(qū)別其它曲霉。雙相真菌在37°C或組織中可以以酵母或小球體形式生長，常用于區(qū)別其它真菌。對于組織、腦脊液等標本，或懷疑罕見真菌或慢生長真菌（如莢膜組織胞漿菌、隱球菌）感染時，建議至少培養(yǎng)1個月；培養(yǎng)箱應(yīng)有濕度控制。
真菌培養(yǎng)結(jié)果的意義：
無菌部位（譬如血液、腦脊液）的標本，真菌培養(yǎng)陽性，即可確定診斷。非無菌標本，兩個試管有單一形態(tài)真菌生長，真菌鏡檢同時陽性者提示有臨床意義；應(yīng)當結(jié)合真菌生長部位、是否連續(xù)培養(yǎng)陽性、真菌鏡檢提示、組織病理學結(jié)果、最高生長溫度及患者的臨床信息，以區(qū)分致病菌和污染菌。
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