摘要：為評價一株來源于動物腸道的糞腸球菌SX106的益生性能，本試驗對其生長曲線，產(chǎn)酸能力，耐酸能力，耐膽鹽能力，藥敏性以及抗氧化能力等指標(biāo)進(jìn)行了分析.試驗得出:該菌株37℃厭氧培養(yǎng)2 h開始進(jìn)入對數(shù)生長期，12 h進(jìn)入穩(wěn)定期;培養(yǎng)液pH值在第2 h迅速下降，第12 h降至4.15，乳酸產(chǎn)量達(dá)到45.56 mmol/L;該菌株在pH 3.0環(huán)境下存活率達(dá)到50%以上，在0.3%膽鹽濃度下存活率達(dá)到95%以上;該菌株對氟苯尼考和多西環(huán)素敏感，對環(huán)丙沙星，左氧氟沙星，頭孢曲松，頭孢噻肟，氧氟沙星，阿莫西林和恩諾沙星中度敏感，對青霉素，鏈霉素，甲氧氨芐嘧啶，氨芐西林，阿奇霉素，卡那霉素和慶大霉素不敏感;對DPPH自由基的清除率達(dá)到88.24%.綜上，糞腸球菌SX106能耐受胃酸環(huán)境，且有良好的耐膽鹽能力和抗氧化能力.


糞腸球菌是革蘭氏陽性菌，能產(chǎn)生乳酸、乙酸等有機(jī)酸，抑制動物腸道內(nèi)有害微生物的生長繁殖，維持動物腸道微生態(tài)平衡?！讹暳咸砑觿┢贩N目錄（2013）》允許將糞腸球菌添加到動物飼料中。本研究旨在評價豬源糞腸球菌的耐酸能力、耐膽鹽能力和抗氧化能力等益生性能，為相關(guān)微生物飼料添加劑的開發(fā)提供菌株來源。


1材料與方法


1.1材料糞腸球菌菌株SX106由重慶三峽職業(yè)學(xué)院實驗室分離鑒定并保存；MRS培養(yǎng)基購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司；豬膽鹽購自合肥博美生物科技有限責(zé)任公司。


1.2方法


1.2.1生長曲線和產(chǎn)酸曲線的測定


取1 mL糞腸球菌SX106菌懸液接種于100 mL MRS液體培養(yǎng)基中，厭氧條件下37℃振蕩培養(yǎng)，分別于第0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、24 h取適量培養(yǎng)液在600 nm波長下測定OD值，同時測定培養(yǎng)液的pH值和乳酸含量。以時間為橫坐標(biāo)，以培養(yǎng)液OD值、pH值和乳酸含量為縱坐標(biāo)，分別繪制曲線。


1.2.2耐酸能力的測定


取1 mL SX106菌懸液分別接種于pH值為2.0、3.0、4.0、5.0的100 mL MRS液體培養(yǎng)基中，厭氧條件下37℃振蕩培養(yǎng)3 h后進(jìn)行活菌計數(shù)，并計算存活率。


1.2.3耐膽鹽能力的測定


取1 mL SX106菌懸液分別接種于0.1%、0.2%、0.3%100 mL豬膽鹽溶液中，厭氧條件下37℃振蕩培養(yǎng)3 h后進(jìn)行活菌計數(shù)，并計算存活率。


1.2.4耐藥性的測定移取100μL SX106菌懸液滴至MRS固體培養(yǎng)基上，用涂布棒涂布均勻后放置藥敏紙片，厭氧條件下37℃培養(yǎng)24 h，觀察抑菌圈是否形成，并精確測量抑菌圈直徑。


1.2.5 DPPH自由基清除能力的測定


將SX106菌懸液以10 000 r/min離心2 min，取400μL上清液與600μL 0.2 mmol/L DPPH溶液（用無水乙醇配制）混合均勻后，室溫下避光反應(yīng)30 min，然后以10 000 r/min離心2 min，取上清液測定OD517nm值（A1）。取400μL與600μL 80%甲醇溶液作為對照，按照同樣步驟測定OD517nm值（A2）；取400μL 80%甲醇溶液與600μL DPPH無水乙醇溶液均勻混合后作為空白對照，測定OD517nm值（A0）。


DPPH自由基清除率計算公式為：

2結(jié)果與分析

2.1生長曲線和產(chǎn)酸曲線


菌株SX106在MRS液體培養(yǎng)基中厭氧培養(yǎng)24 h后，其生長曲線和產(chǎn)酸曲線見圖1。由圖可見，培養(yǎng)2 h后菌體迅速增長，菌液濃度迅速升高，進(jìn)入對數(shù)生長期；8 h后菌體生長速度逐漸緩慢，12 h開始進(jìn)入穩(wěn)定期。培養(yǎng)液pH值（初始6.1）在第2 h迅速下降，第12 h降至4.15，第16～24 h pH值維持在4.05～4.07。乳酸產(chǎn)量隨著時間延長而，不斷增多，在第12 h乳酸產(chǎn)量就達(dá)到45.56 mmol/L，至第24 h最高達(dá)到53.21 mmol/L（圖2）。

圖1糞腸球菌SX106的生長曲線和產(chǎn)酸曲線

圖2糞腸球菌SX106的產(chǎn)乳酸曲線


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