1.3.2五味子乙素提取液抑菌作用測(cè)定
1.3.2.1藥液制備
將分離純化后的五味子乙素凍干粉末，用乙醇配制成質(zhì)量濃度為0.25、0.5、1、2、4、8mg/mL溶液，備用。
1.3.2.2菌種活化
將融化的培養(yǎng)基裝入試管，滅菌后擺斜面。在無(wú)菌條件下用劃線法將供試菌種移接入相應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上，于37℃條件下培養(yǎng)18～24h，進(jìn)行菌種斜面活化。
1.3.2.3供試菌株懸浮液的制備
將活化好的菌種，在無(wú)菌條件下，每種分別挑取兩環(huán)菌苔，各用無(wú)菌水稀釋，配制成一定濃度的菌懸液。
1.3.2.4含菌平板制作
將新鮮配制的培養(yǎng)基于121℃條件下滅菌，當(dāng)培養(yǎng)基冷至50～60℃時(shí)，于超凈工作臺(tái)上將培養(yǎng)基倒入滅菌的90mm培養(yǎng)皿中，每皿15～20mL培養(yǎng)基，待平板冷卻后，每皿中加入0.5mL菌懸液，用三角玻璃涂棒均勻涂成薄板備用。
1.3.2.5抑菌作用測(cè)定
參照平板法，在已放至室溫的培養(yǎng)基上等距均勻放3個(gè)已滅菌的牛津杯，在其中兩個(gè)牛津杯內(nèi)用微量移液器加入等量不同質(zhì)量濃度的五味子乙素提取液，另外一個(gè)作為對(duì)照，加入等量乙醇溶液，將板立即置于Bioscreen C自動(dòng)生長(zhǎng)曲線分析儀上。培養(yǎng)物保持在37°C，持續(xù)振蕩，每5或10分鐘測(cè)量一次OD600，總持續(xù)時(shí)間為24小時(shí)。研究人員利用Bioscreen系統(tǒng)來(lái)測(cè)定不同TIR防御系統(tǒng)在大腸桿菌中表達(dá)時(shí)對(duì)噬菌體感染的反應(yīng)。通過(guò)測(cè)量細(xì)菌的吸光度（OD600），可以了解噬菌體感染對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響，以及TIR系統(tǒng)是否有效抑制了噬菌體的增殖。
2結(jié)果與分析
2.1五味子乙素提取液清除自由基
2.1.1五味子乙素結(jié)構(gòu)鑒定
圖1為將HPLC純化后五味子乙素提取液經(jīng)凍干后的五味子乙素的紅外光譜圖，樣品在2959cm-1處有吸收峰，為—CH2伸縮振動(dòng)峰，說(shuō)明乙素結(jié)構(gòu)中有烷基的存在。樣品在1619cm-1左右處有吸收峰，為芳環(huán)骨架振動(dòng)引起的很強(qiáng)的吸收峰，說(shuō)明了乙素結(jié)構(gòu)中有苯環(huán)的存在。樣品在1418cm-1左右處有吸收峰，為羧基的C＝O的伸縮振動(dòng)峰，說(shuō)明了乙素結(jié)構(gòu)中有羧基的存在。樣品在1329cm-1處有吸收峰，為羧基的C＝O的對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰，說(shuō)明了乙素有羧基的存在。樣品在1046cm-1處有吸收峰，為—OH的變角振動(dòng)峰，說(shuō)明了乙素結(jié)構(gòu)中有羥基的存在。鑒定后的基團(tuán)與圖2中五味子乙素結(jié)構(gòu)符合，基本判定樣品為五味子乙素。圖4為五味子乙素提取液的HPLC圖與圖3五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC對(duì)照，根據(jù)五味子乙素成分的峰面積的百分比得出其純度(純度≥98%)。
2.1.2五味子乙素提取液清除羥自由基
由圖5可知，在0.1～0.5mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，二者對(duì)羥自由基清除作用較好，并且其清除效果都與其質(zhì)量濃度有一定的關(guān)系，隨質(zhì)量濃度的增加，對(duì)自由基的清除效果增強(qiáng)。另外，總體上五味子乙素提取液對(duì)羥自由基清除作用大于VC，其半數(shù)清除質(zhì)量濃度為0.2mg/mL，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.5mg/mL，其清除率接近100%，而抗壞血酸的半數(shù)清除質(zhì)量濃度為0.26mg/mL。
2.1.3五味子乙素提取液清除超氧陰離子自由基
由圖6可知，在0.1～0.5mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，五味子乙素和VC二者對(duì)超氧陰離子自由基清除作用都較好，清除效果也都與其質(zhì)量濃度有一定的關(guān)系，隨質(zhì)量濃度的增加，對(duì)自由基的清除效果增強(qiáng)?？箟难釋?duì)超氧陰離子自由基清除作用總體上大于五味子乙素提取液，其半數(shù)清除質(zhì)量濃度為0.16mg/mL，而五味子乙素提取液的半數(shù)清除質(zhì)量濃度為0.24mg/mL。
2.2五味子乙素提取液的抑菌作用
由表1、2可知，五味子乙素提取液在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對(duì)供試的幾種細(xì)菌都有抑菌活性，其中對(duì)白色念珠菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用最強(qiáng)(圖7)，最低抑菌濃度為0.25mg/mL，對(duì)沙門氏菌和大腸桿菌的抑制作用最弱，最低抑菌濃度為1mg/mL。同時(shí)根據(jù)抑菌圈的變化，五味子乙素提取液對(duì)供試菌的抑制作用與其質(zhì)量濃度也有一定的關(guān)系，總體上隨著其質(zhì)量濃度的提高，抑菌作用增強(qiáng)。
由表3可知，在0.25～8mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，對(duì)供試的3種真菌抑菌活性較弱，特別是兩種霉菌，基本沒有抑菌圈的出現(xiàn)，雖然南陽(yáng)酵母在五味子乙素質(zhì)量濃度為4mg/mL時(shí)產(chǎn)生抑菌圈，但抑菌圈較小，抑制能力較弱。
3結(jié)論
3.1五味子乙素提取液對(duì)自由基清除效果明顯，其中對(duì)羥自由基清除作用大于相同質(zhì)量濃度的VC，其半數(shù)清除質(zhì)量濃度0.2mg/mL；對(duì)超氧陰離子自由基清除作用小于VC，其半數(shù)清除質(zhì)量濃度為0.24mg/mL。
3.2五味子乙素提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、沙門氏菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌均有一定的抑制作用，其中對(duì)白色念珠菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用最強(qiáng)，最低抑菌濃度為0.25mg/mL，對(duì)根霉、黑曲霉、南陽(yáng)酵母無(wú)明顯抑菌活性。
相關(guān)新聞推薦
1、基于特征微生物生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)的食品包裝保質(zhì)期預(yù)測(cè)
2、兩種常規(guī)蒸餾方法獲取的百里香、迷迭香精油及水餾液分子含量的變化（一）
3、UL56基因下游重組病毒對(duì)鴨腸炎病毒生物特性、生長(zhǎng)曲線影響——材料與方法