2結果


2.1 Western blot檢測ING5蛋白表達


為了檢測ING5是否在所轉染細胞中高表達，將A549-control和ING5高表達細胞對數(shù)生長期時用細胞裂解液提取總蛋白，Western blot結果顯示與A549-control相比，ING5在A549-ING5-OE細胞中表達量顯著增高。


2.2 ING5抑制肺癌細胞增殖


顯微鏡下觀察可見A549-control和A549-ING5-OE細胞生長良好，緊密排列，形態(tài)為梭形，細胞之間形成連接。A549-ING5-OE細胞的增殖速度明顯低于A549-control細胞，增殖速度為A549-control的一半，差異有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。


2.3 ING5抑制肺癌細胞克隆形成能力


A549-control和A549-ING5-OE細胞接種在6孔板15 d后，計數(shù)細胞數(shù)多于50個的克隆，結果表明與A549-control相比ING5高表達肺癌細胞的克隆形成能力明顯降低，A549-ING5-OE細胞的克隆形成率為A549-control細胞的50%，差異有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。


2.4 ING5抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生長


裸鼠皮下接種A549-control和A549-ING5-OE細胞，7 d后成瘤，隨著時間的增加，接種A549-control裸鼠腫瘤生長較快，接種A549-ING5-OE的裸鼠腫瘤生長明顯較慢，結果表明ING5高表達后顯著抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生長。


2.5接種A549-ING5-OE及A549-control細胞后大鼠體積變化情況


接種A549-ING5-OE細胞成瘤，腫瘤體積大小基本無增加。A549-control細胞接種成瘤，腫瘤體積明顯增大。從腫瘤生長曲線可以看出ING5高表達的肺癌細胞腫瘤生長明顯被抑制，腫瘤體積較對裸鼠A549-control細胞接種顯著減小。

3討論


作為候選抑癌基因家族成員，近年來ING家族在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用和機制受到越來越多的關注。路美玲等研究結果表明，與正常肝組織相比，肝癌細胞株ING5 mRNA表達明顯降低，在腫瘤轉化過程中與正常組織相比ING5表達明顯被抑制。趙春陽等研究結果表明，在腫瘤細胞中ING5表達水平越低，腫瘤的惡性程度就越高。


研究表明，肺癌的發(fā)生、發(fā)展以及侵襲、轉移是多基因參與、多步驟發(fā)生的過程。隨著近年來外科技術發(fā)展的日趨完善，新的化學治療藥物和局部治療方法不斷出現(xiàn)，但對肺癌的總體治療效果卻不甚理想，因此從分子水平研究肺癌發(fā)生、發(fā)展中的分子機制，針對肺癌中異常分子的治療藥物和治療方法就成了新的研究熱點，并促進了肺癌分子靶向治療的出現(xiàn)。本研究中，通過慢病毒介導的基因轉染方法使ING5在A549細胞中高表達，發(fā)現(xiàn)ING5高表達后與對照肺癌細胞相比，其增殖能力和克隆形成能力均降低，說明在細胞水平ING5抑制了肺癌細胞的增殖和克隆形成能力。通過裸鼠在體水平的研究同樣發(fā)現(xiàn)，ING5抑制了裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生長，動物實驗研究結果同樣說明ING5抑制了肺癌細胞的增殖，與上述細胞實驗結果相符。


綜上所述，ING5在肺癌細胞高表達后抑制了肺癌細胞的增殖，提示ING5在肺癌的發(fā)生和發(fā)展中起到了抑癌基因的作用，為肺癌的基因治療提供了新的靶點。


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