細(xì)菌廣泛分布于我們的生活環(huán)境中，是空氣和水中的微生物指標(biāo)之一?？諝庵械募?xì)菌總數(shù)是指1m3空氣中各種細(xì)菌的總數(shù)目。水中的細(xì)菌總數(shù)是指1ml水樣在普通瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃經(jīng)24h培養(yǎng)后所生長的細(xì)菌菌落總數(shù)。一般認(rèn)為每1ml水中細(xì)菌總數(shù)小于100個為極清潔的水，100～1000個為清潔水，1000～10000個為不太清潔水，10000個以上即為不清潔水。人們飲用了不清潔的水可產(chǎn)生各種疾病，如:細(xì)菌性痢疾、霍亂沙門氏菌病等。
1材料與方法
1.1實驗器材
培養(yǎng)皿(直徑90～100mm)，500ml大燒杯，100℃溫度計，500ml三角瓶，高壓蒸汽滅菌鍋，恒溫生化培養(yǎng)箱，放大鏡。
1.2培養(yǎng)基的配方
蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、氯化鈉5g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml。
2總結(jié)與討論
2.1實驗過程
培養(yǎng)基在配制時各種配方稱好后混于水中，經(jīng)過加熱熔化，熔化過程中要不斷攪拌使各成分均勻混于水中，并在加熱同時不斷補充失去的水分，以補足至原來的體積。否則培養(yǎng)基各成份混合不均勻，水分不足，培養(yǎng)基營養(yǎng)不全，不利于細(xì)菌生長。配制好的培養(yǎng)基若有沉渣或混濁，趁熱用三至四層紗布過濾，濾液最好用pH計調(diào)節(jié)pH值為7.2～7.4，過酸或過堿都不利于細(xì)菌生長，并在2h內(nèi)滅菌。滅菌的高壓鍋最好是單獨使用放于無菌室中，滅菌好的培養(yǎng)基可于高壓鍋中存放1～2h;待無菌室滅菌后，再打開高壓鍋取出備用，以達(dá)到備用培養(yǎng)基絕對無菌。
2.2無菌室的滅菌
一般要求只要打開無菌室的紫外燈20min后，無菌室就可以達(dá)到無菌，但經(jīng)過實驗驗證無法達(dá)到要求，細(xì)菌空白對照實驗如表1所示。
表1空白對照實驗
從4組細(xì)菌空白實驗可以看出無菌室達(dá)到真正無菌只要打開無菌室紫外燈30min后，再打開無菌操作臺的風(fēng)機預(yù)熱20min后進(jìn)行水樣細(xì)菌接種實驗，這樣就可得到相對準(zhǔn)確的細(xì)菌總數(shù)分析結(jié)果。這一結(jié)果是紫外燈更換90d左右所得。但紫外燈使用1a以上，接近1.5a，開紫外燈30min后，再預(yù)熱無菌操作臺20min后進(jìn)行空白實驗，不能達(dá)到無菌室真正無菌的要求，建議紫外燈1a更換1次。
2.3培養(yǎng)基的溫度
水樣接種時，培養(yǎng)基的溫度非常關(guān)鍵，溫度高了容易把水樣中的細(xì)菌燙死，溫度低了一方面瓊脂培養(yǎng)基容易凝固(尤其在冬季)，另一方面水樣與培養(yǎng)基混合不均勻，培養(yǎng)出的菌落分不開，成團(tuán)生長，不易計數(shù)。培養(yǎng)基的溫度在40～45℃左右最佳，接種時最好用溫度計控制溫度，建議在無菌室放一個電爐，溫度達(dá)不到時，以便加熱使溫度保持在一定范圍內(nèi)，也可用熱水浴保持培養(yǎng)基的溫度。
3結(jié)論
試驗表明，要準(zhǔn)確掌握水樣中的細(xì)菌總數(shù)，關(guān)鍵是細(xì)菌的培養(yǎng)。細(xì)菌培養(yǎng)的前提不僅有配制良好且無菌培養(yǎng)基，真正無菌的接種室，而且要有接種時培養(yǎng)基適宜的溫度。
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