樹舌靈芝（Ganoderma applanatum）隸屬于擔子菌綱（Basitdiomycetes）多孔菌目（Polyporales）多孔菌科（Polyporaceae）靈芝屬（Ganoderma），為我國傳統(tǒng)的藥用真菌。樹舌靈芝性平，味苦，具有調(diào)節(jié)機體免疫力、抗腫瘤、抑菌消炎等多種功效[1－4]。樹舌靈芝含有的多糖等多種活性成分能抑制乙肝病毒，調(diào)節(jié)機體免疫功能，抑制血小板凝集，已開發(fā)為治療乙型肝炎的藥物，如“復方樹舌片”“肝必復”和“樹舌肝泰”等，市場需求量大，應用前景廣闊[5－6]。2009年以來，筆者采集野生樹舌靈芝種質(zhì)資源并進行了馴化栽培，目前已取得成功并具有一定的規(guī)模，產(chǎn)生了良好的經(jīng)濟效益。
目前國內(nèi)外樹舌靈芝的研究大多集中在提取物的分離及藥理活性研究等方面[7－9]，樹舌靈芝馴化栽培方面較少，導致生產(chǎn)中缺乏優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的菌株，嚴重影響樹舌靈芝野生資源的開發(fā)利用。本試驗對不同來源的10個野生樹舌靈芝分離菌株進行了菌絲生長、液體菌種和出菇篩選試驗，以期獲得產(chǎn)量高、綜合農(nóng)藝性狀優(yōu)良且性狀穩(wěn)定，適合人工栽培的優(yōu)良菌株。
1材料與方法
1.1供試菌株
本試驗供試菌株均為筆者從泰安及其周邊地區(qū)收集的野生樹舌靈芝子實體上分離純化后獲得，保存于泰安市農(nóng)業(yè)科學研究院食用菌研究所。來源、采集時間及編號見表1。
表1供試菌株來源、采集時間及編號
1.2培養(yǎng)基及栽培基質(zhì)
PDA固體培養(yǎng)基：具體配方與制備方法參見參考文獻[10]。
PDA液體培養(yǎng)基：PDA固體培養(yǎng)基不加瓊脂。
母種培養(yǎng)基為PDA加富培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g·L－1（去皮煮汁）、葡萄糖20 g·L－1、蛋白胨3 g·L－1、磷酸二氫鉀3 g·L－1、硫酸鎂1.5 g·L－1、瓊脂20 g·L－1，pH自然。
原種培養(yǎng)基配方：棉籽殼39%、玉米芯20%、闊葉樹木屑30%、麥麩8%、生石灰粉1%、硫酸鈣1%、蔗糖1%，含水量60%～65%。
栽培種培養(yǎng)基配方：棉籽殼40%、玉米芯20%、闊葉樹木屑30%、麥麩8%、生石灰粉1%、硫酸鈣1%，含水量60%～65%。
1.3拮抗試驗
在無菌條件下將10個供試菌株中的任意2個菌株配對組合，接種于PDA培養(yǎng)基平板上，置于25℃恒溫箱中進行對峙培養(yǎng)，觀察有無拮抗反應。
1.4菌絲生長試驗
1.4.1固體培養(yǎng)
將保存的斜面菌種活化后接種于PDA培養(yǎng)基平板上，25℃黑暗培養(yǎng)7 d，采用“十字交叉法”測量菌落直徑，計算菌絲平均生長速率（mm·d－1）。同時觀察菌絲長勢并比較不同菌株的菌落形態(tài)。每個菌株設5個重復。
1.4.2液體培養(yǎng)
取PDA培養(yǎng)基活化培養(yǎng)的菌塊（0.5 mm2）接種于PDA液體培養(yǎng)基中，每瓶接種3個菌塊，溫度28℃，150 r·min－1振蕩培養(yǎng)9 d。收集菌絲體，過濾后50℃烘干1 d，稱重，計算菌絲體得率。每個菌株設3次重復。
1.5出菇試驗
采用熟料栽培，聚丙烯塑料袋規(guī)格為18 cm×39 cm×0.004 cm，菇棚內(nèi)墻式排袋兩端割口出芝。發(fā)菌期間，觀察菌絲長勢，用劃線法測定菌絲生長速度，調(diào)查菌袋污染情況并及時清理。出芝期間觀察和記錄子實體形態(tài)特征，調(diào)查出芝期菌袋污染率，統(tǒng)計產(chǎn)量。
1.6優(yōu)良菌株栽培穩(wěn)定性試驗
選取生物學效率高、綜合農(nóng)藝性狀優(yōu)良的菌株進行栽培穩(wěn)定性試驗。出菇試驗同1.5。每次接種50袋，共3次。觀察出芝情況，記錄產(chǎn)量。
1.7數(shù)據(jù)處理
干芝生物學效率（P，%）公式為：
式中：m1表示子實體干重（g）；m2表示培養(yǎng)料干重（g）。
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