目的：通過使用三氧化二砷（As2O3）誘導雌激素受體（estrogen receptor，ER）的再次表達，通過對乳腺癌細胞生長曲線的研究來探討ER在陰性乳腺發(fā)展過程中的作用。方法：本研究以ER陰性的人乳腺癌細胞MDA-MB-231為研究對象，采用免疫組化、生長曲線檢測法等生物學方法來檢測ER在陰性乳腺癌發(fā)展過程中的作用。結(jié)果：以MCF-7作為陽性對照，免疫組化結(jié)果顯示，As2O3可以誘導ER的再次產(chǎn)生。進一步觀測MDA-MB-231細胞的生長曲線，發(fā)現(xiàn)ER可明顯抑制其生長，與對照組相比，有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論：ER的再表達可抑制陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231的生長。
實驗步驟
免疫組化：（1）細胞爬片。取對數(shù)生長期的細胞進行常規(guī)消化制成單細胞懸液，加入到預先已經(jīng)放置蓋玻片的24孔板中，每孔加入預先計算的細胞懸液量，放入培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后，取出蓋玻片，PBS洗干凈，風干。冷丙酮固定10min.（2）加入3%HZOZ適量，37℃，30min，以用來清除內(nèi)源性過氧化物酶的影響；洗干凈；山羊血清封閉；加入ER抗體，過夜；洗干凈，加辣根酶標記的鏈霉卵白素，37℃，30min，洗干凈；DAB顯色，顯微鏡下觀察；自來熟洗滌，蘇木素染色，沖洗反藍；酒精脫水，二甲苯透明，封片。用PBS代替一抗制成陰性對照。MCF-7作為陽性對照。
Westem Blot實驗：（1）提取細胞的總蛋白。收集經(jīng)過不同處理的盡量多的細胞，預冷的1×PBS洗3次，800g，離心5min/每次。棄上清，加入細胞裂解液適量，置于冰上裂解10min，每隔2min吹打一次，800g，離心5min。（2）吸取上清利用己準備好的標準曲線計算出濃度并進行WB實驗。
生長曲線實驗：將對數(shù)生長期的MDA-MB-231細胞調(diào)整細胞濃度為5×105/mL，換含As2O3的培養(yǎng)液，至As2O3終濃度分別為5.0μmol/L，連續(xù)培養(yǎng)48h。采用電子監(jiān)控技術(shù)監(jiān)測其生長變化。
ER對MDA-MB-231乳腺癌細胞株生長曲線的影響。
實驗分為兩組（contrl組，即未經(jīng)As2O3處理；實驗組，經(jīng)As2O3處理），采用電子檢測探究ER對MDA-MB-231乳腺癌細胞株生長曲線的影響。結(jié)果如圖3所示，處理后細胞生長曲線變得平緩，細胞生長受到抑制，提示我們或許ER抑制了MDA-MB-231細胞的生長。
生長曲線結(jié)果提示我們ER可抑制乳腺癌細胞的生長，這或許可以為臨床治療ER陰性患者提供一定的思路。
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