本實(shí)驗(yàn)將以上兩組不同的血清對(duì)Sp2/0—Ag14細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，通過測(cè)定細(xì)胞在培養(yǎng)過程中的生長(zhǎng)曲線，得出細(xì)胞在不同時(shí)期的生長(zhǎng)密度并以此為依據(jù)來判斷不同血清培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)效果。


生長(zhǎng)曲線包括三個(gè)時(shí)期：滯留期：此期為分種后的初期，不分裂繁殖，細(xì)胞數(shù)目不增加，甚至略減，一般需24～96小時(shí)，指數(shù)期：這是細(xì)胞繁殖的旺盛期，一般為3～5天有時(shí)也把它叫潛伏期，平臺(tái)期：此時(shí)細(xì)胞已達(dá)飽和濃度，停止生長(zhǎng)繁殖，要及時(shí)分種傳代，否則將逐漸衰亡[2]。


在測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的同時(shí)，取細(xì)胞達(dá)到最大濃度前的細(xì)胞數(shù)與達(dá)到這一數(shù)量所需的時(shí)間計(jì)算出細(xì)胞的倍增時(shí)間[3]，這種方法相對(duì)于細(xì)胞計(jì)數(shù)法[4]來說，能有效的減少實(shí)驗(yàn)誤差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，從而使獲得的數(shù)據(jù)更加客觀，可靠。


細(xì)胞倍增時(shí)間法


細(xì)胞倍增時(shí)間的測(cè)定：按生長(zhǎng)曲線計(jì)算細(xì)胞的倍增時(shí)間。取細(xì)胞峰值前一天計(jì)的得數(shù)（Y），接種細(xì)胞數(shù)（X），及生長(zhǎng)時(shí)間（T）計(jì)算。


倍增時(shí)間=T/A A=log2Y/X[6]


步驟


將3%谷氨酰胺和1.1%丙酮酸鈉按1%比例加入RPMI 1640培養(yǎng)液中，用7.5%碳酸氫鈉調(diào)培養(yǎng)液的PH值為7.2-7.4。取Sp2/0-Ag14種細(xì)胞一瓶,用彎頭吸管反復(fù)吹打培養(yǎng)瓶細(xì)胞面，制成細(xì)胞懸液,分種到兩個(gè)100ml培養(yǎng)瓶中，9ml培養(yǎng)液/瓶，分別加入兩組牛血清（10%）1ml，放入5%二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱擰松瓶蓋進(jìn)行開放式培養(yǎng),對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),待細(xì)胞濃度達(dá)到104/ml時(shí)將細(xì)胞接種至96孔板中，每隔24h計(jì)數(shù)一次,連續(xù)計(jì)數(shù)一周，紀(jì)錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)[5]。細(xì)胞的最大增值濃度不低于106/ml。將記錄的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總，繪制出細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，根據(jù)公式計(jì)算出細(xì)胞倍增時(shí)間。

Sp2/0-Ag14細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖

采用細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定法，雖然也要進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，但細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的誤差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響較小，從而使結(jié)果更加客觀，精確。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：采用14日齡采血牛血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)優(yōu)于采用3月齡血清；采用細(xì)胞倍增時(shí)間法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)效果評(píng)價(jià)要優(yōu)于細(xì)胞計(jì)數(shù)法。

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