洋蔥伯克霍爾德菌群(Burkholderiacepaciacomplex,Bcc)是包括洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderiacepacia)在內(nèi)的一系列表型類似且16S rRNA高度同源的革蘭陰性菌的總稱[1-3],臨床上是引起囊性纖維化(cystic fibrosis)患者、慢性肉芽腫(chronic granulomatous)患者及免疫力低下患者嚴重感染的條件致病菌。因其復雜且可變的基因組,Bcc可適應低氧環(huán)境,實現(xiàn)呼吸道上皮黏附,且對臨床多種抗生素存在耐藥性。一旦感染,患者生命安全會受到巨大威脅。
本研究選取2個Bcc的典型種作為研究對象,其中洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderiacepacia)2株,新洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderiacenocepacia)1株,分別在氯化鈉、甘油、蔗糖調(diào)節(jié)的不同Aw條件下培養(yǎng),通過全自動生長曲線分析儀繪制生長曲線,探究不同調(diào)節(jié)劑作用下Bcc最低生長Aw及Aw對其生長曲線的影響。
不同水分活度(Aw)條件下Bcc生長曲線
本研究表明,培養(yǎng)溫度為32.5 ℃時,Bcc在不同調(diào)節(jié)劑作用下最低生長Aw為0.978(氯化鈉)、0.944~0.955(甘油)、0.971~0.978(蔗糖),菌株之間有微小差異。本實驗室在之前的研究中,通過定性實驗表明菌株20170801-1在30~35 ℃最低生長Aw為0.974~0.978(氯化鈉)、0.944(甘油)、0.962~0.965(蔗糖)[17],與本研究結果基本一致,且與假單胞菌屬的最低生長Aw接近。
對3種調(diào)節(jié)劑所得結果進行對比發(fā)現(xiàn),氯化鈉和蔗糖作用下Bcc最低生長Aw接近,與之相比甘油作用下則更低。這與文獻報道相一致:在討論Aw作用時,氯化鈉與蔗糖對大多數(shù)細菌的影響是相似的,但甘油對于革蘭陽性球菌抑制作用更強,而對于革蘭陽性桿菌及革蘭陰性桿菌抑制作用更弱。
由于OD600生長曲線與傳統(tǒng)平板計數(shù)所得生長曲線有所區(qū)別,在細胞濃度較低時,OD600無法及時反映細胞數(shù)量變化。因此本研究無法直接探討Aw對Bcc生長延滯期、生長速率等經(jīng)典參數(shù)的影響,而是選擇TTD、曲線峰值、曲線斜率作為間接指標。隨Aw降低,Bcc生長曲線TTD延長,曲線峰值及斜率整體呈下降趨勢。研究結果可以一定程度上估計Aw對Bcc生長曲線在延滯期、生長速率的影響,但仍有局限性,后續(xù)可通過建立Bcc生長模型進一步研究。明確Aw對Bcc生長的影響,有助于非無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)在藥品處方設計、生產(chǎn)等階段正確評估Bcc污染的風險,為建立有效控制措施提供依據(jù)。
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