2 結(jié)果與分析
2.1 革蘭氏染色形態(tài)學(xué)分析
據(jù)觀察，W. cibaria BWL4的菌落形態(tài)呈現(xiàn)出中間凸起的光滑乳白色的小圓點。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，菌體多以成對或單個短棒狀出現(xiàn)，大小略有區(qū)別。
革蘭氏陽性菌呈紫色或藍紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。W. cibaria BWL4的革蘭氏染色結(jié)果顯示，菌落呈現(xiàn)紫色，由此可判斷W. cibaria BWL4為革蘭氏陽性菌。
2.2 生長曲線及產(chǎn)酸曲線
W. cibaria BWL4的生長和產(chǎn)酸規(guī)律如圖所示。從生長曲線可以看出，W. cibaria BWL4在接種2 h后進入對數(shù)生長期，在16 h后進入生長穩(wěn)定期，48 h時的A???值達到2.4左右。
從產(chǎn)酸曲線可以看出：當(dāng)W. cibaria BWL4處于對數(shù)生長期時，培養(yǎng)基的pH值快速下降；處于生長穩(wěn)定期時，其pH值也逐漸趨于穩(wěn)定，pH值保持在3.9左右。
2.3 耐酸、耐膽鹽性能分析
W. cibaria BWL4中加入不同濃度鹽酸和不同體積分數(shù)牛膽鹽時的生長情況如圖所示。圖中：1為對照組；2、3、4分別對應(yīng)pH值為4.0、3.0、2.5；5、6、7分別對應(yīng)加入體積分數(shù)為0.1%、0.2%、0.3%的牛膽鹽。W. cibaria BWL4在不同pH值和牛膽鹽體積分數(shù)下培養(yǎng)24 h時A???值見表1所列。
表1 W. cibaria BWL4在不同pH值和（牛膽鹽）時A???值
組別 pH值 牛膽鹽體積分數(shù)/%
對照 2.5 3.0 4.0 0.1 0.2 0.3
測定1 2.313 0.087 0.476 1.759 1.280 0.713 0.098
測定2 2.309 0.079 0.482 1.818 1.302 0.737 0.097
測定3 2.318 0.083 0.473 1.798 1.296 0.725 0.098
由表1可知：與對照組比較，W. cibaria BWL4在不同pH值下生長均受到抑制，在pH值為4.0時，其A???為1.792左右，這與已報道的植物乳桿菌C182、腸系膜明串菌株C10、F27、C4在培養(yǎng)基pH值為4.0時A???均不超過1.4相比較，其耐受能力最好；當(dāng)pH值為3.0時，植物乳桿菌C182、腸系膜明串菌株C4、F27的生長狀況不及W. cibaria BWL4菌株，說明W. cibaria BWL4的耐酸性能更好；當(dāng)pH值為2.5時，菌株幾乎無法生長，說明W. cibaria BWL4不能耐受此酸性環(huán)境。
從圖表可以看出，W. cibaria BWL4耐膽鹽性能與耐酸性能相似，在不同體積分數(shù)牛膽鹽條件下均受到抑制，當(dāng)牛膽鹽體積分數(shù)為0.1%時，W. cibaria BWL4生長良好，在0.3%的牛膽鹽條件下，W. cibaria BWL4無法耐受此膽鹽環(huán)境。
2.4 抗真菌譜分析
本文通過平板對峙實驗，發(fā)現(xiàn)W. cibaria BWL4對黃曲霉菌、擴展青霉菌、灰霉菌及鐮刀菌均有抑制作用，其中菌株對灰霉菌的抑制效果最佳，對鐮刀菌的抑制最弱。
2.5 抑細菌譜分析
W. cibaria BWL4的無菌上清液對大腸桿菌、單核細胞增生李斯特菌、丙二酸鹽克羅諾362、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌均有明顯的抑制效果。
上清原液、pH值7.0的W. cibaria BWL4上清液和W. cibaria BWL4上清液。將上清液的pH值調(diào)到中性條件和單純的MRS培養(yǎng)基均無抑菌作用。
不同處理方式對指示菌的作用效果見表2所列。從表2可以看出，上清原液對單核細胞增生李斯特菌的抑制效果最好，對沙門氏菌的效果相對較差。
表2 W. cibaria BWL4對指示菌的抑制作用
處理方式 大腸桿菌 單核細胞增生李斯特菌 丙二酸鹽克羅諾362 沙門氏菌 金黃色葡萄球菌
上清液 +++ ++++ ++++ ++ +++
pH值7.0上清液 NE NE NE NE NE
MRS培養(yǎng)基 NE NE NE NE NE
注：NE表示無抑制作用；+表示抑菌圈直徑7~<11 mm；++表示抑菌圈直徑11~<14 mm；+++表示抑菌圈直徑14~<17 mm；++++表示抑菌圈直徑17~20 mm。
3 結(jié) 論
本實驗通過W. cibaria BWL4對真菌的平板對峙方法發(fā)現(xiàn)，W. cibaria BWL4對黃曲霉菌、灰霉菌、擴展青霉菌和鐮刀菌均能產(chǎn)生顯著的抑制作用，這與已報道的結(jié)果一致。本研究通過牛津杯實驗發(fā)現(xiàn)W. cibaria BWL4的細胞上清液對大腸桿菌、單核細胞增生李斯特菌、丙二酸鹽克羅諾362、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌均有明顯的抑制效果，相較于已報道的植物乳桿菌DY-6的抑菌效果更為顯著。因此本文推測W. cibaria BWL4的細胞上清液中含有能夠破壞致病菌細胞完整性的活性物質(zhì)，后續(xù)實驗將會通過多種方式來提取這些活性物質(zhì)，例如乳酸菌可以通過產(chǎn)生揮發(fā)性物質(zhì)來抑制病原真菌。因此后續(xù)將通過研究GC-MS檢測其產(chǎn)生的具有拮抗作用的揮發(fā)性物質(zhì)成分，進一步完善W. cibaria BWL4的抑菌機理。
本實驗經(jīng)分離純化出食竇魏斯氏菌W. cibaria BWL4，通過對其系統(tǒng)發(fā)育樹和生長曲線的研究以及對其耐酸、耐膽鹽的性能分析，了解了W. cibaria BWL4的基本生物學(xué)特性，并采用平板對峙與牛津杯的實驗方法探究W. cibaria BWL4的抑菌譜特性，為其對病原菌的抑制機理提供了重要信息，有助于進一步研究其對抑制各類致病菌代謝機制。
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