摘 要：文章通過(guò)構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)研究食竇魏斯氏菌W. cibaria BWL4 的種屬親緣性，利用生長(zhǎng)曲線分析W. cibaria BWL4作為乳酸菌的生物學(xué)共性，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討其耐酸、耐膽鹽以及抑菌譜特性。研究發(fā)現(xiàn)：W. cibaria BWL4 具有較好的產(chǎn)酸性能和耐酸、耐膽鹽的特性；其菌液對(duì)黃曲霉菌、灰霉菌和擴(kuò)展青霉菌均有不同程度的抑制作用；W. cibaria BWL4的細(xì)胞上清液對(duì)大腸桿菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、丙二酸鹽克羅諾362、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌均有明顯的抑制效果。該結(jié)果為進(jìn)一步研究W. cibaria BWL4在乳制品中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
乳酸菌(Lactic acid bacteria, LAB)是一類以碳水化合物為原料，代謝產(chǎn)生大量乳酸的兼性厭氧細(xì)菌。乳酸菌可以調(diào)節(jié)食物口感、改善風(fēng)味，同時(shí)作為腸道菌群的一部分，可以保持胃腸道微生態(tài)平衡，促進(jìn)胃腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，對(duì)提高消化率起著至關(guān)重要的作用。從發(fā)酵食品中分離出的乳酸菌是一種更加安全、更可靠的天然生物防腐劑，它產(chǎn)生的一些諸如有機(jī)酸、脂肪酸、過(guò)氧化氫、肽類等具有抗菌活性的物質(zhì)在抑制食品中的真菌毒素方面具有巨大的潛力，從而發(fā)揮了LAB對(duì)食品保存和安全的作用。LAB因能夠產(chǎn)生乳酸、乙醇、細(xì)菌素、胞外多糖等多種高價(jià)值的代謝物而被廣泛應(yīng)用于食品與工業(yè)領(lǐng)域。
魏斯氏菌(Weissella)是乳酸菌成員之一，為革蘭氏陽(yáng)性、過(guò)氧化酶陰性、無(wú)芽孢形成的桿狀菌株。目前被分離和鑒定出的魏斯氏菌有25種，多數(shù)魏斯氏菌生長(zhǎng)溫度為28~37℃，最適pH值為4.0~9.5。研究表明，魏斯氏菌可以發(fā)酵產(chǎn)生細(xì)菌素、胞外多糖、有機(jī)酸、雙乙酰等抑菌物質(zhì)，因此，在食品與醫(yī)藥行業(yè)中具有廣闊的發(fā)展前景。
食竇魏斯氏菌(W. cibaria)首次被發(fā)現(xiàn)于泰國(guó)發(fā)酵食品中。從奶酪中分離的W. cibaria CH2菌株具有良好的耐酸、耐鹽、聚集能力以及較強(qiáng)的耐藥性和抑菌活性。W. cibaria JW15和W. cibaria CMS1都具有較強(qiáng)的抗氧化作用，能夠改善由致病菌或氧化應(yīng)激引起的疾病。本文通過(guò)研究W. cibaria BWL4的生物學(xué)特性，發(fā)現(xiàn)其不僅具有良好的耐酸、耐膽鹽性能，還對(duì)各種病原真菌有明顯的抑制作用，是一株有潛力的益生菌。因此，本文推測(cè)W. cibaria BWL4可能產(chǎn)生一些諸如細(xì)菌素、胞外多糖等代謝物來(lái)抑制致病菌，為深入研究W. cibaria BWL4的抑菌機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。
1 材料與方法
1.1 材料及儀器
1.1.1 菌株與載體
黃曲霉菌株(Aspergillus flavus JXZS-117-1)由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油作物研究所惠贈(zèng)；灰霉菌株(Botrytis cinerea FJH5)由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)種子健康中心惠贈(zèng)；擴(kuò)展青霉菌株(Penicillium ecpansum)由以色列農(nóng)業(yè)部研究組提供；鐮刀菌株(Fusarium spp.)、W. cibaria BWL4由本實(shí)驗(yàn)室分離純化所得；金黃色葡萄球菌、大腸桿菌菌株、單核細(xì)胞增生李斯特菌、沙門(mén)氏菌以及丙二酸鹽克羅諾362均冷藏于本實(shí)驗(yàn)室-80℃冰箱。
1.1.2 試劑及試劑盒
鹽酸購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；牛膽鹽購(gòu)于上海麥克林生化科技有限公司；瓊脂粉購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司；LB肉湯購(gòu)于青島海博生物技術(shù)有限公司；MRS肉湯、革蘭氏染色試劑盒均購(gòu)于廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。
1.1.3 儀器設(shè)備
所用儀器設(shè)備有：，立式壓力蒸汽滅菌器(上海三申醫(yī)療器械有限公司)，pH計(jì)(上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司)，小型冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司)，紫外分光光度計(jì)(濟(jì)南飛賽電子科技有限公司)，立式智能精密搖床(上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司)，全自動(dòng)生長(zhǎng)曲線分析儀(Bioscreen)。
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